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CFX Manager軟件操作快速指南
顯示實(shí)驗(yàn)設(shè)置窗口中一個(gè)預(yù)覽的程序。
點(diǎn)擊Create New,打開程序編輯器創(chuàng)建一個(gè)新的程序。點(diǎn)擊Select Existing,通過瀏覽器加載一個(gè)程序或?qū)ζ溥M(jìn)行編輯。使用Express Load下拉菜單直接加載一個(gè)程序或?qū)ζ溥M(jìn)行編輯。點(diǎn)擊Edit Selected,打開程序編輯器編輯所選程序的各個(gè)步驟。點(diǎn)擊Start Run開始運(yùn)行當(dāng)前加載的程序。
PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。最好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套、口罩,勤換手套。
PCR試劑配制應(yīng)使用最高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用高壓滅菌。
試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻 。
專用移液器,要求加樣精準(zhǔn),移液器定期校正。
樣品放置:將PCR反應(yīng)體系加入到0.2ml低緣八聯(lián)管,蓋上管蓋;或加入低緣96孔板,用光學(xué)級封膜封好。注意,必須帶一次性塑料手套,不要讓手指接觸到反應(yīng)管表面。將反應(yīng)管按順序放入儀器的加熱孔中。
為了最小化實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)偏差,先制備混合反應(yīng)液,所有樣本有三個(gè)重復(fù)。大劑量包裝的反應(yīng)試劑,使用前進(jìn)行分裝(引物、模板,水),盡量減少試劑的反復(fù)凍融。
加入試劑之前, 混勻一下后瞬時(shí)離心,以免放置時(shí)間長了濃度不均勻。
無論探針法還是染料法,每次試驗(yàn)都要做NTC(No Template Control),以驗(yàn)證有無污染發(fā)生。
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